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    化学发光免疫分析仪介绍

    2021-03-22 05:00:22

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    一,简介

      化学发光免疫分析仪由免疫反应系统和化学发光分析系统两部分组成。化学发光分析系统利用化学发光物质通过催化剂的催化和氧化剂的氧化形成激发状态的中间体,该激发状态的中间体回到稳定的基状态时,同时发射光子(hm),利用发光信号测量仪测量光量子的产量。免疫反应系统将发光物质(在反应剂的激发下产生激发状态的中间体)直接标记在抗原(化学发光免疫分析)和抗体(免疫化学发光分析)上,或酶作用于发光物质。

    化学发光免疫分析仪的核心检测器件是光电倍增管(PMT),通过单光子检测并传输到放大器,增加高压电流放大,放大器将模拟电流转换成数字电流,数字电流将发光信号通过R232数据线传输到计算机,得出临床结果。

    二,分类

          1.化学发光标记免疫分析。

    化学发光标志免疫分析又称化学发光免疫分析(CLIA),是一种用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有亚啶酯类化合物-acridiniumester(AE),是有效的发光标志物[3],起动发光试剂(NaOH2H2O2)发光,强直接发光在1秒内完成,快速闪烁发光(见图1)。亚啶酯作为标志用于免疫分析,化学反应简单快捷,不需要催化剂;检测小分子抗原采用竞争法,大分子抗原则采用夹心法,非特异性结合少,底部低;与大分子结合不会减少产生的光量,从而提高灵敏度。

    2.发光酶免疫分析。

    化学发光酶免疫分析(chemiluminescentenzymeimmunoassay,CLEIA)应属于酶免疫分析(chemiluminescentenzyme光剂,操作步骤与酶免疫分析完全相同[5]:用酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体)进行免疫反应,免疫反应复合物上的酶再作用于发光基础,在信号试剂的作用下发光,用发光信号测定器进行发光测定。目前常用的标记酶是辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP),各有发光基础。

    第三,发光试剂。

        CLEIA常用的基质是鲁米诺(32氨基邻苯二甲酰胺,luminol),或者它的衍生物,如异鲁米诺(42氨基邻苯二甲酰胺),是一种重要的发光试剂。在碱性缓冲液中进行过氧化物酶和活性氧[过氧化阴离子(O2-)、单线态氧(1O2)、羟自由基(OH·)、过氧化氢(H2O2)的存在下,产生激发态中间体,当它们返回基质时发光,波长为425nm

    早先,鲁米诺直接标记抗原(或抗体),但标记后的发光强度降低,影响灵敏度。最近,鲁米诺用过氧化物酶标记抗体。免疫反应后,鲁米诺用作发光基础。在过氧化物酶和启动发光试剂(NaOH2H2O2)的作用下,鲁米诺发光,发光强度取决于酶免疫反应物中酶的浓度。KodakAmerliteTM半自动分析系统是利用该系统专门设计的。

    第四,增强发光酶

      增强型发光酶免疫分析,在发光系统中加入增强型发光剂,如对2碘苯酚等,以增强发光信号,并在较长时间内保持稳定,便于重复测量,从而提高分析的灵敏度和准确性。自动化分析仪还可以通过计算机严格控制,自动操作,如加试剂睾酮、混合、温育、洗涤、加试剂、发光计数、数据处理、标准曲线绘制,直至完成患者血清样品的分析和打印结果。Am erliteTM发光增强酶免分析系统用荧光素、噻唑等增强剂, 其发光时间可持续长达20m in, 试剂盒有甲状腺功能检测的促甲状腺素、三碘甲腺原氨酸、甲状腺素、甲状腺素结合球蛋白、游离甲状腺素, 与性激素有关的有促黄体激素、促卵泡激素、人绒毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睾酮, 以及其他方面的如癌胚抗原、铁蛋白、地高辛等。


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